大腸菌やアグロバクテリウムの形質転換について

私は、通常大腸菌の場合にはChemical transformation法、30 kb以上あるDNAを大腸圏に導入する場合やアグロバクテリウムの場合にはelectroporation法を用いて形質転換を行なっています。

その効率についてきちんとデータを取ったわけではありませんが、個人的な印象を紹介します。

まず、大腸菌のChemical transformation用コンピテントセルですが、作製したその日にそのまま凍らせずに形質転換に用いると非常に効率が良く、市販のものよりも数倍良い印象です。
一方、−70℃で凍結保存したものについては効率がガクッと落ちて、おそらく市販のものよりも1桁くらい効率が落ちます。
もっとも通常は20~100コロニーも出てくればインサートがクローニングされたコロニーも含まれているので十分なわけですが…
コロニーが少ない場合にはフレッシュなものか市販のものを使ってみると良いかもしれません。

大腸菌のelectroporation用コンピテントセルについては、その傾向が顕著です。
基本的には大腸菌を集菌後に滅菌水で何度かリンスして、フレッシュな状態でそのままelectroporationに用いています。Electroporation法はフレッシュなものを使えば、市販のものと同様に非常に効率が良く、たくさんのコロニーが出てきます。
一方で、凍結保存したものについては非常に効率が悪く、コロニーが出るか出ないかといったところです（凍結の仕方について何かコツがあるのでしょうか？）
Electroporationについては、フレッシュなものか市販のコンピテントセルを用いることをお勧めします。

アグロバクテリウムのelectroporation用コンピテントセルについては、自作のものしか使ったことがないので市販のものとの比較はできませんが、フレッシュであれ、凍結保存したものであれ、たくさんコロニーが出てくるので問題ありません。
ただし、集菌後のリンスが悪いとelectroporation中にスパークが生じます（DNAの塩濃度が高い場合にもスパークが生じます）
スパークが生じた場合にはコロニーが出てこないだけでなく、感電事故のリスクもあるので、集菌後のリンスはしつこく丁寧に行う、plasmid DNAも綺麗に精製したものを使うように気をつけましょう。