実験関係ノート #4 DNAの精製

・エタノール沈殿

使いどころ・・・DNAから不要な塩, 有機溶剤, タンパクなどを除去
薬剤
　3M NaOAc
　100% EtOH
　70% EtOH

1. サンプルの1/10量の3M NaOAcを加える
2. 100% EtOHをサンプルの倍量加え攪拌する
3. R.T., 15000rpm, 30min
4. 上清除去
5. 70% EtOH を加えてWash
6. R.T., 15000rpm, 5min
7. 上清除去
8. 風乾
9. 1 x TEに溶かす

・イソプロパノール沈殿

使いどころ・・・より核酸を溶出させたいとき, ブタノールなどをしっかりと除去したいとき

1. サンプルと等量のイソプロパノールを加え攪拌する
2. R.T., 15,000rpm, 15~20min
3. 上清除去(DNAペレットが透明なため注意)
4. 70% EtOHでWashする
5. 風乾
6. 1 x TEに溶かす

・ブタノール濃縮

使いどころ・・・DNA溶液を濃縮する

1. サンプルと等量のn-ブタノールを加えて拡販する
2. R.T., 15,000rpm, 1min
3. 上層除去
1~3を繰り返すことでサンプル中の水を減らしていく
4. イソプロパノールやエタノールでDNAを抽出する