高度多機能酵素TM1270の機能および構造解析Thermotoga maritima
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高度多機能酵素TM1270の機能および構造解析Thermotoga maritima
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acscatal.4c05275
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Research ArticleDecember 11, 2024
Functional and Structural Analyses of a Highly Multifunctional Enzyme TM1270 from the Hyperthermophile Thermotoga maritimaClick to copy article link
宮本哲也*新田俊平本間博史伏信伸也*
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ACS Catalysis
Cite this: ACS Catal. 2024, 14, 24, 18817-18830
https://doi.org/10.1021/acscatal.4c05275
Published December 11, 2024
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超好熱菌Thermotoga maritimaは、典型的なアラニンおよびグルタミン酸ラセマーゼを持たないが、d-アミノ酸代謝酵素およびl-およびd-アミノ酸代謝に関連する多機能酵素を有する。興味深いことに、本研究では、この生物に由来する1つのPLP fold-typeI酵素であるTM1270が、アミノ酸ラセマーゼ活性、シスタチオニンβ-リアーゼ活性、セリンデヒドラターゼ活性、スレオニンアルドラーゼ活性、アスパラギン酸4-脱炭酸酵素活性、アミノ酸アミノトランスフェラーゼ活性という6つの異なる酵素活性を持つことを見出した。これら6つの酵素活性について、基質特異性、pH依存性、温度依存性、速度論的パラメータなどの特性を明らかにした。β-リアーゼ活性は、速度論的パラメータに基づくと、6つの活性の中で最も高かった。さらに、Lys202とシッフ塩基を形成するピリドキサール5′-リン酸の内部アルジミン体を持つTM1270の結晶構造を決定した。結晶構造と変異解析の結果に基づいて、6つの酵素活性の反応機構を提案した。
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Subjects
what are subjects
Bacteria
Monomers
Peptides and proteins
Phosphates
Theoretical and computational chemistry
Keywords
what are keywords
d-amino acid
multifunctional enzyme
racemase
lyase
aminotransferase
dehydratase
aldolase
Theremotoga maritima
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TM1270の純度と4次構造、TM1270の6つの異なる活性の速度曲線、サイズ排除クロマトグラフィーとSDS-PAGE、PLPフォールドI型酵素の系統樹、結晶学的データの収集と精製統計、本研究で使用したプライマー (PDF)
結晶学的データ (CIF)
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高度多機能酵素TM1270の機能解析と構造解析
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1サポート情報: 超好熱菌Thermotoga maritima由来高度多機能酵素TM1270の機能・構造解析宮本哲也1*, 新田俊平2, 本間浩1, 伏信真也2,3*1北里大学大学院薬学研究科(〒108-8641 東京都港区白金5-9-1); 2東京大学大学院工学系研究科生物工学専攻(〒113-8657 東京都文京区弥生1-1-1)、3東京大学微生物学研究所(〒113-8657 東京都文京区弥生1-1-1): miyamotot@pharm.kitasato-u.ac.jpShinya Fushinobu: asfushi@mail.ecc.u-tokyo.ac.jp
2図S1. TM1270の純度と4次構造 a, 精製したTM1270(2μg)とその変異体((b) Y106F, (c) Y51F, (d) R53A, (e) R53K, (f) K202A, (g) W108P, (h) K231Y, (i) V330Y)を12%ゲルのSDS-PAGEで解析した。TM1270(4μg)を8%ポリアクリルアミド分離ゲルで分離した。Markerac9729kDa6645bMarkerY106FTM127020MarkerY51F9729kDa6645209729kDa664520dMarkerR53A9729kDa664520eMarkerR53K9729kDa664520Markerfh9729kDa6645gMarkerW108PK202A20MarkerK231Y9729kDa6645209729kDa664520iMarkerV330Y9729kDa664520jMarkerTM1270242146kDa66
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