【要約】PCR （ポリメラーゼ連鎖反応）を用いた分子クローニング、細胞工学のための教育的手引き

サイード・シャハブッディン・ホセイニら、J Biol Eng.

PubMed

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Molecular cloning using polymerase chain reaction, an educational guide for cellular engineering - PubMed

概要

背景 過去数十年にわたり、分子クローニングは生物科学に大きな変化をもたらしてきた。基礎科学、臨床、製薬、環境など様々な分野に大きな影響を与え、組換えDNAの利用は細胞工学の分野にも進出を始めている。その中で、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)は最も重要なツールの一つです。
新規かつ効率的なPCR試薬、クローニングキット、ソフトウェアの出現により、プライマー設計からPCRの実行、PCR産物のシークエンス、シークエンスデータの解析、そして最終的に遺伝子発現の評価まで、PCRクローニングの全てのステップを説明する簡潔かつ包括的なプロトコルが必要とされている。
本論文の目的は、PCR を遺伝子クローニングに応用するための包括的なプロトコルを、実行可能な例とともに提供することである。

結果 例えば、tdTomato蛍光遺伝子の配列は、適切な制限酵素の部位が埋め込まれたPCRプライマーを用いて増幅された。制限酵素の選択とPCRプライマーの設計の実際的な基準について説明する。PCR産物を配列決定のためにプラスミドに効率的にクローニングする方法と、配列決定データを連続的に解析するためのウェブベースの無料ソフトウェアが紹介されている。
最後に、クローニングの成功の確認について、目的の蛍光遺伝子とマウス標的細胞を用いて説明する。

結論

本論文では、PCR を用いた包括的なプロトコルとその重要なコツについて、実例を挙げて紹介した。この方法論は、PCRクローニングの力を素早く活用したいが、細胞工学の機能的なin vitroやin vivoの側面に主眼を置いている研究者のロードマップとして役立つ。

キーワード 生物工学、クローニング、教育ガイド、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）、組換えDNA、トランスダクション、トランスフェクション。

図版

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